2. 怎么区分质粒的电泳条带？
一般来说，质粒迁移速度由快到慢分别是共价封闭原形（超螺旋）形式、线性和开放圆形（开环）形式（图4），并伴随着其他形式。原因是：电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关，分子构象越大，空间位阻阻力越大。超螺旋结构较为紧密，因此跑的快；开环质粒由于DNA断开，阻力增大，因此跑的最慢。
3. 怎么验证质粒是否可用？
综上所述，质粒存在多少条带与多种因素相关，没有存在绝对的衡量标准。但如果用限制性内切酶消化质粒DNA，只会出现一条清晰的条带。并且，由于酶切形成线性化DNA片段，其电泳迁移速率会比对照组原始质粒的超螺旋结构速度慢，可以检验质粒是否被切开。
附参考文献：
【1】Vologodskii, A. V., Crisona, N. J., Laurie, B., Pieranski, P., Katritch, V., Dubochet, J., & Stasiak, A. (1998). Sedimentation and electrophoretic migration of DNA knots and catenanes. Journal of molecular biology , 278 (1), 1–3. https://doi.org/10.1006/jmbi.1998.1696
【2】Schvartzman, J. B., Martínez-Robles, M. L., Hernández, P., & Krimer, D. B. (2010). Plasmid DNA replication and topology as visualized by two-dimensional agarose gel electrophoresis. Plasmid, 63(1), 1–10. https://doi.org/10.1016/j.plasmid.2009.11.001
【3】Schmidt, T., Friehs, K., Schleef, M., Voss, C., & Flaschel, E. (1999). Quantitative analysis of plasmid forms by agarose and capillary gel electrophoresis. Analytical biochemistry, 274(2), 235–240. https://doi.org/10.1006/abio.1999.4291
【4】Higgins, N. P., & Vologodskii, A. V. (2015). Topological Behavior of Plasmid DNA. Microbiology spectrum, 3(2), 10.1128/microbiolspec.PLAS-0036-2014. https://doi.org/10.1128/microbiolspec.PLAS-0036-2014
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